АРМАТУРА И ТРУБЫ ИЗ НЕРЖАВЕЮЩЕЙ СТАЛИ ДЛЯ ПИЩЕВОЙ, ПИВОВАРЕННОЙ, МОЛОЧНОЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТЕЙ

0 Комментарии

Содержание

Хрустящие трубочки с карамельным кремом

Ох, уж эти вафельные трубочки с карамельной начинкой! Устоять невозможно. Помню в детстве впервые их попробовала на море. И все. Забыть их невозможно. Когда дома появилась вафельница, мы с братом их пекли с большим восторгом и удовольствием.

Раньше тяжелее было с вафельницей, она была громоздкая и не очень удобная, но мы исхитрялись. А теперь все проще — поэтому самое время приготовить вкуснешее лакомство из детства.

Готовы?

Тогда, поехали…

Нам потребуется

на 10-15 трубочек

Тесто для вафель

  • Яйцо — 2 шт.
  • Мука пшеничная — 100 г
  • Сахар тростниковый — 120 г
  • Масло сливочное — 75 г
  • Масло растительное — 75 г
  • Соль — 1 щеп.

Карамельный крем

  • Масло сливочное — 150 г
  • Сливочная карамель — 200 г (рецепт приготовления сливочной карамели смотрите здесь). Можно заменить на вареную сгущенку, но с карамелью, которую вы сделаете сами будет намного вкуснее)))

Процесс приготовления вафельных трубочек

  1. В чашу для взбивания переложите яйца и сахар. Хорошо перемешайте. Затем добавьте растительное масло, растопленное сливочное масло, щепотку соли и еще раз хорошо все объедините (все продукты должны быть комнатной температуры).
  2. После того, как вы перемешали все ингредиенты, добавьте просеянную пшеничную муку и перемешайте все продукты на низких оборотах миксера.
  3. Приготовьте вафельницу, заранее смазав её растительным маслом. Испеките вафли согласно инструкции Вашей вафельницы. Готовые вафли сверните в трубочки и дайте трубочкам остыть.
  4. Для крема размягченное сливочное масло взбейте до посветления. Добавьте частями сливочную карамель и хорошо все объедините.
  5. Переложите крем кондитерский мешок и начините им трубочки.

Приятного аппетита и готовьте с удовольствием!

состав, калорийность, польза, и разнообразие начинок -АО РАХАТ

СОДЕРЖАНИЕ

Что такое вафли и как они выглядят, объяснять не надо. Вафельные трубочки знакомы нам с детства. До сих пор это одно из любимых лакомств многих. Хрустящая корочка, кремовая начинка — это то, что оставляет приятное послевкусие. Вафли-трубочки хочется покупать снова и снова.

История происхождения вафельных трубочек

История вафель началась давным-давно. Сейчас уже даже сложно назвать точную дату появления этого лакомства. По одной из версий, вафли готовили еще в Древней Греции. Согласно другой, вафли в Америке появились в XVII столетии — их привезли голландцы. Известно, что в Западной Европе они появились примерно в XVIII веке.

В 1869 году была представлена первая вафельница, которую изобрел Корнелиус Свартхаут. С этой даты начался вафельный бум. Посуда для выпечки кондитерского изделия представляла собой два металлических листа, соединенных между собой. Такую сковороду грели на угле и постоянно переворачивали.

Вафли любят во всем мире. Они стали любимым десертом во многих странах. Только у каждого народа есть свой рецепт вафель и называются они по-разному. Особую популярность они получили у голландцев  — stroopwafel. В Бельгии лакомство называют брюссельскими вафлями — прямогульные, мягкие и сладкие. В Норвегии — это вафельные трубочки krumkake.

Какое бы название они не носили, их любят и готовят в больших количествах каждый день.

Что входит в состав вафель-трубочек

Вафельные трубочки — это кондитерское мучное изделие. Делают его из жидкого теста.  Готовые пластины сворачивают трубочкой. Обычно пропитывают начинкой. Корпус трубочки получается хрустящим, тонким и хрупким.

Состав вафельных трубочек:

  • пшеничная мука — главный ингредиент, от которого зависит качество готового изделия;
  • сахар — придает вафлям стекловидность, благодаря чему они сохраняют свою хрусткость даже при повышенной влажности;
  • растительные жиры и масла — облегчают отделение выпеченных вафельных листов от формы;
  • сухое молоко — делает вкус вафельных трубочек нежнее;
  • яичный порошок — повышает пищевую ценность, дает золотистый цвет;
  • крахмал — улучшает текстуру теста;
  • разрыхлитель — добавляют для пористой структуры вафли.

Начинки для вафель трубочек обычно делаются кремовой текстуры и разных вкусов.

Разнообразие начинок

Процесс производства вафельных трубочек состоит из двух основных этапов: подготовка вафельных листов и подготовка начинки.

Все сырье в определенном порядке загружается в специальную машину, где готовится тесто. Готовое тесто выливают в вафельницы — печи, где выпекаются вафельные листы. Горячие вафельные формочки оставляют остывать или сразу после выпекания скручивают и заполняют заранее приготовленной начинкой.

Изначально начинка для вафельных трубочек был специально сваренный крем. Но сейчас технологии позволяют разнообразить наполнители. Используются начинки:

  • жировые — самые распространенные;
  • фруктовые и ягодные — делаются на основе пюре из фруктов или ягод;
  • помадные — содержит большое количество патоки.

Вкусовые добавки могут быть различными: со вкусом пломбира, абрикоса, смородины, шоколада, чизкейка, яблочным вкусом, сливочным, кофе, крем-брюле и т.д. Здесь нет ограничений. Каждый производитель старается придумать что-то новое, чтобы удивить и удовлетворить даже изысканные вкусы потребителей.

Калорийность вафельных трубочек

По калорийности вафли-трубочки не уступают другим кондитерским изделиям. Тем, кто следит за фигурой, не стоит злоупотреблять ими. Пищевая ценность в 100 граммах (примерно):

  • калорийность — 560 Ккал;
  • белки — 6 г;
  • жиры — 36 г;
  • углеводы — 48 г.

Сколько содержится калорий в вафельных трубочках, зависит от компонентов, входящих в начинку. Вафельные коржи не содержат вредных ингредиентов. Самыми калорийными считаются трубочки с шоколадной начинкой.

Несмотря на то что вафли очень вкусные, употреблять ежедневно этот десерт, а тем более в больших количествах, не стоит. Иначе быстро можно набрать вес.

Полезные свойства вафель-трубочек

Вафли-трубочки — мучная сладость, которая отлично подходит к чаю, кофе либо в качестве быстрого перекуса. Среди полезных свойств лакомства можно отметить следующие:

  • продукт быстро утоляет голод;
  • улучшает умственную деятельность, так как содержит сахар;
  • содержит легко усваиваемые углеводы, поэтому быстро восстанавливают силы и энергию.

Выбирайте  вафельные трубочки от производителей, которые заботятся о качестве своей продукции и потребителях. Кондитерская фабрика «Рахат» предлагает хрустящее лакомство с разными вкусовыми начинками. Десерт имеет нежную текстуру и незабываемый вкус. Подарите себе минуту удовольствия, наслаждаясь вкусом изысканного вафель-трубочек от компании «Рахат».

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

Сладкие, с рыбой и трубочки. 3 рецепта нежных домашних вафель как из ресторана

24 августа в мире отмечают День вафель. Чем не повод забыть об овощных салатах и перекинуться на вафельную диету? Altapress.ru подобрал самые интересные рецепты вкусного лакомства, которое подойдет и на завтрак, и на ужин.

Домашние вафли.

pxfuel.com

1 Шоколадные вафли

Ингредиенты

Для вафель
  • Какао-порошок — 3 столовых ложки;
  • Пшеничная мука — 130 г;
  • Соль — щепотка;
  • Молоко — 100 мл;
  • Разрыхлитель для теста — 1 чайная ложка;
  • Растительное масло — 2 чайных ложки;
  • Сливочное масло — 4 столовых ложки.
Для начинки
  • Молочный шоколад — 70 г;
  • Молоко — 100 мл;
  • Мороженое — по вкусу.

Шоколадные вафли.

edimdoma.ru

Приготовление

  1. Замесить тесто. Смешать яйца и сахар, тщательно взбить, влить молоко и растопленное сливочное масло. Всыпать соль и перемешать до однородности. Порционно добавить муку, разрыхлитель и какао-порошок. Тщательно перемешать ингредиенты до тягучести;
  2. Испечь вафли. Разогреть вафельницу и смазать ее растительным маслом. Выложить тесто в вафельницу и выпекать примерно 3 минуты;
  3. Приготовить глазурь. Растопить шоколад с молоком на водяной бане или в микроволновке, тщательно помешивая. Полить вафли и положить на них мороженое. Готово!

2 Вафли с красной рыбой и шпинатом

Ингредиенты

Для вафель
  • Мука — 150 г;
  • Соль, перец — по вкусу;
  • Разрыхлитель — 1 чайная ложка;
  • Яйца — 2 штуки;
  • Кефир — 100 мл;
  • Шпинат свежий — 70 г;
  • масло сливочное — 60 г;
  • Сыр — 100 г.
Для начинки
  • Сыр творожный — 200 г;
  • Сметана нежиреная — 1 столовая ложка;
  • Укроп — несколько веточек;
  • Семга или другая красная рыба — 120 г.

Вафли со шпинатом и красной рыбой.

gastronom.ru

Приготовление

  1. Растопить сливочное масло и смешать его со шпинатом, кефиром, яйцами, сливочным маслом и натертый сыр;
  2. Отдельно соединить муку, соль, перец и разрыхлитель;
  3. Соединить две получившиеся массы и тщательно перемешать;
  4. Жидкое тесто влить в вафельницу и выпечь вафли;
  5. Начинить вафли творожным сыром, укропом и тонко нарезанной рыбой.

3 Вафли-трубочки

Ингредиенты

Для вафель
  • Куриное яйцо — 4 штуки;
  • Маргарин — 250 г;
  • Сахар — 200 г;
  • Пшеничная мука — 180 г;
  • Сода — 0,5 чайной ложки;
  • Столовый уксус — 0.1 чайной ложки;
  • Ванильный сахар — 1 столовая ложка;
Для начинки
  • Вареное сгущенное молоко — 1 банка;
  • Арахис — по вкусу.

Вафли-трубочки.

food.ru

Приготовление

  1. Замесить тесто. Растопить маргарин на огне, водяной бане или в микроволновке и дать ему остыть. Добавить сахар, ванильный сахар и яйца. Соду, гашенную уксусом, добавить в получившуюся массу. Всыпать муку и тщательно перемешать тесто;
  2. Выпечь вафли до подрумянивания. Снять их ножом с вафельницы и скрутить в трубочки;
  3. Трубочки остудить и начинить вареным сгущенным молоком, посыпать измельченным арахисом.

Сладкие трубочки с белково-сахарным кремом

Сладкая выпечка – это всегда праздник для семьи. Те хозяйки, которые часто балуют домочадцев вкусными угощениями, знают, что с домашними изделиями чаепитие вдвойне вкуснее и желаннее. Этот рецепт аппетитных трубочек с нежным кремом удивит всех за столом. Тесто и крем отлично подходят друг к другу. Румяные, воздушные трубочки – это настоящее чудо. Попробовав одну нельзя остановиться!
Требуемые продукты для крема:
— 50 мл – воды
— 10 г лимонной кислоты
— 2 белка
— 180 г сахара.
Необходимые продукты основы трубочек:
— 100 г маргарина
— 3 яйца
— 70 мл воды
— 15 г белого сахара
— 15 г пищевой соли
— 350 г хлебопекарной муки
— пакет быстродействующих дрожжей.
Дополнительные ингредиенты:
— желток (для смазки)
— сладкая пудра (для украшения)
— масло (для выпечки).
Пошаговый процесс приготовления теста:
1.Маргарин подготовить заранее. Он должен быть комнатной температуры. Отправить его в удобную посуду.

2.Туда же разбить яйца.

3.Влить воду. Необходимо чтобы жидкость была теплой, но не горячей.

4.Всыпать соль и сахар. Равные пропорции этих ингредиентов позволят тесту приобрести нейтральный вкус.


5.Всыпать дрожжи.

6.Добавить муку. Необходимости в том, чтобы просеять этот продукт — нет. Она отлично подойдет и так.

7.Замесить плотное тесто.

8.Раскатать тесто скалкой. Затем нарезать на полоски. Толщина полосок должна быть около 10 см.

9.На обычную скрученную бумагу нужно намотать тесто. Выложить изделия на противень. Заранее на него нужно положить пергамент и смазать его маслом.

10.Промазать изделия яичным желтком. Выпекать при 180 градусах 20 минут.


Приготовление крема:
1.В кастрюлю влить воду. Включить плиту.

2.Сразу же всыпать сахар.

3.Добавить лимонную кислоту. Довести смесь до кипения.

4.Отдельно взбить яичные желтки. Взбивать их нужно хорошо, чтобы получилась густая пена.

5.Из кастрюли сироп вылить в белки. Взбивать еще 5 минут.

6.Готовым кремом начинить трубочки. Посыпать их сладкой пудрой.




Приятного аппетита!

ЛАКОМСТВ НА ВАЛЕНТИНА — Как сделать трубочки для конфет из рулонов туалетной бумаги!

 

Я просто обожаю упаковывать подарки и угощения с помощью лент и бантов, а также создавать контейнеры, чтобы набивать их солеными и сладкими вещами. Я также люблю перерабатывать и перепрофилировать, поэтому я очень рада поделиться тем, как создавать трубочки для конфет из рулонов туалетной бумаги, набивать их угощениями ко Дню Святого Валентина и раздавать некоторым из моих любимых валентинок в этом году. 🙂  Это так просто, и у вас, вероятно, есть много вещей, которые вам нужны, чтобы сделать это на скорую руку…

СПИСОК ПОСТАВОК…

Рулоны туалетной бумаги

Декоративная бумага, разрезанная на 4″ * 6″

Нарезанные кусочки прозрачной пленки для виолончели размером 12″ * 8″

Ленты в ассортименте (я использовала 3-дюймовый тюль и розовую и белую рафию)

БИРКИ ВАЛЕНТИНЫ или купите наши теги, щелкнув ЗДЕСЬ

Лентопротяжный механизм

Ножницы

Конфеты (я использовала сердечки для разговоров, объятия Херси и поцелуи на День святого Валентина)

РУЛОНЫ ТУАЛЕТНОЙ БУМАГИ COVER: Нанесите хороший клей на обе 4-дюймовые стороны вашей декоративной бумаги.Оберните рулоны туалетной бумаги и прижмите концы, чтобы закрепить. Нанесите клей на все края бирки и нажмите на трубку, чтобы закрепить.

ЗАПОЛНИТЕ ЭТИ МИЛЫЕ ТРУБЫ: Нанесите небольшое количество хорошего клея на средний верх и низ 12-дюймовой стороны прозрачной пленки для виолончели. Поместите заднюю часть декорированной трубки на клей и сверните, прижав нижний клей, чтобы закрепить. Завяжите одну сторону виолончели кусочком ленты, чтобы закрыть конец. Наполните угощением, а затем завяжите ленту на другом конце, чтобы закрыть и закрепить.Добавьте больше милых лент, если хотите. 🙂

 

Чтобы купить наши этикетки ко Дню святого Валентина, НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ 🙂

 Узнайте больше о развлечениях на День святого Валентина…

Если вам понравился этот пост, вы должны проверить наш Какао Валентина…

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ или фото выше, чтобы просмотреть наш РУКОВОДСТВО ПО ВЗРЫВАЮЩЕЙСЯ КНИГЕ!

 

 

 

 

Функциональная идентификация днРНК в пыльцевых трубках черешни (Prunus avium) с помощью транскриптомного анализа с использованием одномолекулярного секвенирования с длительным считыванием | Исследования в области садоводства

Аннотация

Черешня ( Prunus avium ) — популярный фрукт с высокой питательной ценностью и отличным вкусом.Хотя пыльца играет важную роль в двойном оплодотворении и последующем образовании плодов этого вида, мало что известно о транскриптоме его пыльцевой трубки. В этом исследовании мы идентифицировали 16 409 транскриптов, используя секвенирование одной молекулы. После фильтрации 292 мобильных элементов мы провели дальнейший анализ, включая классификацию мРНК, прогнозирование функции генов, анализ альтернативного сплайсинга (АС) и идентификацию длинной некодирующей РНК (днРНК), чтобы получить представление о транскриптоме пыльцы.Отфильтрованные транскрипты могут быть сопоставлены с последовательностями 3438 кодирующих областей генома черешни. Анализы GO и KEGG выявили сложные биологические процессы при удлинении пыльцевых трубок. Всего было предсказано 2043 события АС, 7 из которых были идентифицированы в различных органах, таких как лист, пестик и пыльцевая трубка. Используя BLASTnt и инструмент оценки кодирующего потенциала (CPAT), мы выделили в общей сложности 284 днРНК, среди которых 154 квалифицированы как естественные антисмысловые транскрипты (NAT). Поскольку NAT могут быть обратным дополнением кодирующих последовательностей мРНК, они могут связываться с кодирующими последовательностями.Анализы антисмысловой трансфекции показали, что NAT могут регулировать уровни экспрессии своих комплементарных последовательностей и даже влиять на условия роста пыльцевых трубок. Таким образом, это исследование характеризует транскрипты пыльцы P. avium и закладывает основу для выяснения физиологических и биохимических механизмов, лежащих в основе полового размножения в мужских гаметах этого вида.

Введение

Во время полового размножения растений пыльца играет жизненно важную роль в транспортировке мужских гамет к семязачатку, а клеточные и регуляторные механизмы, лежащие в основе удлинения пыльцевых трубок, постоянно находятся в центре внимания исследований 1 .Рост пыльцевых трубок представляет собой привлекательную модельную систему, включающую ряд физиологических и биологических процессов, таких как передача сигнала и рост поляризованных клеток 2,3 . Однако механизм сложного процесса удлинения пыльцевых трубок остается во многом неизвестным. Секвенирование РНК пыльцевых трубок является полезным методом получения глобальной информации о транскрипции в качестве отправной точки для исследований, связанных с пыльцой. Данные краткого считывания последовательностей пыльцевых трубок были получены для различных видов 4–7 в ходе исследований, которые были сосредоточены главным образом на дифференциальной экспрессии генов в различных сортах пыльцы.Для дальнейшего исследования молекулярного механизма роста пыльцевых трубок необходимы относительные данные полного транскриптома и дополнительные изоформы транскриптов; Технология одномолекулярного секвенирования с длительным считыванием (секвенирование PacBio) хорошо подходит для решения таких вопросов 8 .

Черешня является одним из самых популярных фруктов в мире и очень питательна, содержит полезные уровни пищевых волокон, аскорбиновой кислоты и каротиноидов 9 . Поскольку развитие зрелых плодов зависит от двойного оплодотворения, жизнеспособная пыльца важна для производства черешни.Геном черешни с собранной последовательностью 272,4 Мб был выпущен в 2017 г. 10 ; этот геном был основан на коротких чтениях из содержащих пыльцу органов, таких как цветки и пыльники, секвенированных с использованием платформы Illumina 10,11 . Однако данные секвенирования конкретно из пыльцевых трубок черешни отсутствуют, особенно глобальные данные, основанные на технологии секвенирования с длительным считыванием. В последнее время все больше исследований сосредоточено на различиях в транскрибируемых изоформах (таких как AS и некодирующие РНК), которые стали важными регуляторами экспрессии генов и развития растений -12- .Технология секвенирования с длинным считыванием — это способ получения относительных данных о полном транскриптоме и дополнительных транскриптов/различных транскрибируемых изоформ (например, полученных в результате АС или некодирующей РНК), и она полезна для исследования роста пыльцевых трубок.

АС представляет собой обычное биологическое явление, при котором один кодирующий ген может продуцировать несколько белков 13 . Было обнаружено, что у растений АС встречается в 61,2%, 42,4% и 56,4% генов у Arabidopsis thaliana , риса ( Oryza sativa ) и кукурузы ( Zea mays ), соответственно 14–16 и играет важную роль в важнейших физиологических процессах.Например, ген-репрессор цветка FLOWERING LOCUS M в Arabidopsis thaliana имеет две изоформы, FLM-β и FLM-δ , продукция которых увеличивается при низкой и высокой температуре окружающей среды соответственно, и эти изоформы регулируют время цветения 17 . Ген кукурузы ZmbohB имеет две изоформы, которые по-разному экспрессируются в ответ на различные абиотические условия, такие как холод, жара и солевой стресс 18 . Было показано, что АС участвует в регуляции яровизации, циркадных часов и реакции на биотический и абиотический стресс у нескольких видов 17,18 .Тем не менее, сравнительно мало исследований АС было проведено у розоцветных или, в частности, у черешни.

Помимо прямого воздействия АС на растения, длинные некодирующие РНК (днРНК), предварительно определенные как РНК длиной более 200 пар оснований с низким потенциалом кодирования, также являются ключевыми молекулярными регуляторами биологии и физиологии растений 19 . История исследований днРНК насчитывает более 25 лет, когда были проведены исследования XIST на людях 20 . Из-за их низкого кодирующего потенциала и того факта, что они иногда имеют небольшие модификации с кодирующими мРНК, lncRNAs первоначально рассматривались как транскрипционный шум генома, и только позже было установлено, что они сами по себе функциональны.У растений lncRNAs можно разделить на две группы: полиаденилированные и неполиаденилированные 21 ; неполиаденилированные днРНК представляют собой недавно идентифицированную группу, впервые обнаруженную у риса и A. thaliana 22,23 , а полиаденилированные днРНК, некоторые из которых транскрибируются РНК-полимеразой II, состоят из трех групп: длинные межгенные некодирующие РНК (нкРНК), интронные некодирующие РНК (инкРНК) и природные антисмысловые транскрипты (NAT) 21 . NAT транскрибируются в направлении, противоположном кодирующим белок генам, и широко распространены у животных и растений 21 .LncRNAs участвуют в нескольких аспектах биологии растений, включая регуляцию транскрипции, модификацию гистонов, посттранскрипционную регуляцию и продукцию малых РНК 24-27 . Эти процессы могут по-разному влиять на яровизацию растений, передачу светового сигнала, развитие корней и устойчивость к абиотическим и биотическим стрессам 26,28–31 . LDMAR — важная днРНК из риса, которая способствует развитию пыльцевого зерна, когда уровень ее транскрипта превышает пороговое значение 32 .Прежде всего, днРНК были идентифицированы и вовлечены в рост растений и реакцию на стресс. Однако исследования днРНК в пыльце черешни до сих пор отсутствуют.

В этом исследовании, чтобы изучить функцию транскриптов в регуляции генов в пыльце черешни, мы использовали одномолекулярное секвенирование с длительным считыванием, чтобы получить широкий набор информации о транскриптоме пыльцевой трубки черешни. В этой рукописи были проанализированы транспозоны, типы изоформ, AS и lncRNA.Информация, полученная в этом исследовании, облегчит дальнейшие исследования роста пыльцевых трубок черешни.

Результаты

Предварительный анализ полноразмерного транскриптома с помощью секвенирования одной молекулы

Чтобы получить как можно больше различных транскриптов пыльцевых трубок, мы собрали и культивировали пыльцевые зерна трех разных сортов черешни: «Rainier», «Lapins» и «21-21». Всхожесть составила 81.2%, 79,8% и 68,5% соответственно. Затем мы извлекли РНК для построения библиотеки. Несколько фракционированных по размеру библиотек были созданы с использованием устройства SageELF (дополнительная рис. 1). Каждую библиотеку SMRTBell со штрих-кодом обрабатывали на платформе PacBio RS II с двумя ячейками SMRT. После получения необработанных данных адаптеры и искусственные последовательности удаляли (рис. 1). После контроля качества (дополнительная рис. 2d – f) чтения были сгруппированы и подготовлены для анализа (рис. 1). Всего мы получили 465 607 высококачественных прочтений вставок из шести клеток SMRT (таблица 1).Средняя длина чтения для библиотек с каждым диапазоном размеров составляла 1920 пар оснований для библиотеки размером 1–2 тысячи пар оснований, 2647 пар оснований для библиотеки размером 2–3 тысячи пар оснований и 3811 пар оснований для библиотеки размером 3–6 тысяч пар оснований (дополнительные рис. 2а, б, в). Доли полноразмерных нехимерных прочтений (FL-прочтений) и поли-А-прочтений составляли 43,1% и 57,0% соответственно в библиотеке размером 1–2  т.п.н.; 40,2% и 53,9% в библиотеке 2–3 kb; и 2,3% и 26,5% в библиотеке размером 3–6 КБ (таблица 1, дополнительная таблица 1). Поскольку чтения FL полезны при сборке транскриптов, мы также определили статистику распределения длин чтений FL в библиотеках разного размера (дополнительный рис.3). Мы обнаружили, что средняя длина в библиотеках 1–2 kb, 2–3 kb и 3–6 kb составляла 1592 bp, 2427 bp и 3594 bp соответственно (дополнительная таблица 1).

Основной конвейер для PacBio секвенирования пыльцевых трубок черешни

Рис. 1

Анализ состоит из трех частей, начиная с фильтрации последовательностей и кластеризации необработанных данных для получения окончательных изоформ (синие прямоугольники). Для получения глобальной информации было выполнено пять видов биоинформатического анализа (зеленые прямоугольники).Анализ GO и KEGG, AS и анализ NAT были основаны на анализе некоторых «зеленых прямоугольников» (анализы в фиолетовых прямоугольниках).

Рис. 1

Основной конвейер для PacBio секвенирования пыльцевых трубок черешни

Анализ состоит из трех частей, начиная с фильтрации последовательности и кластеризации необработанных данных для получения окончательных изоформ (синие прямоугольники). Для получения глобальной информации было выполнено пять видов биоинформатического анализа (зеленые прямоугольники). Анализ GO и KEGG, AS и анализ NAT были основаны на анализе некоторых «зеленых прямоугольников» (анализы в фиолетовых прямоугольниках).

Таблица 1

Основные данные секвенирования PacBio.

Образец . Сотовый . Читает вставку . Средняя длина вставки . Консенсусные изоформы . Полированные изоформы . 90 180
1-2 кб 2 143452 1920 14724 9096
2-3 кб 2 163008 2647 15195 6385
3–6 KB 2 159147 3811 2706 928
79696 7777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777977778 96 928 . .
Сотовый . Читает вставку . Средняя длина вставки . Консенсусные изоформы . Полированные изоформы .
1-2 кб 2 143452 1920 14724 9096
2-3 кб 2 163008 2647 15195 6385
3–6 KB 2 159147 3811 2706 928
Таблица 100028 Таблица 100028 Таблица 10002.

Образец . Сотовый . Читает вставку . Средняя длина вставки . Консенсусные изоформы . Полированные изоформы . 90 180
1-2 кб 2 143452 1920 14724 9096
2-3 кб 2 163008 2647 15195 6385
3–6 KB 2 159147 3811 2706 928
79696 7777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777977778 96 928 . .
Сотовый . Читает вставку . Средняя длина вставки . Консенсусные изоформы . Полированные изоформы . 90 180
1-2 кб 2 143452 1920 14724 9096
2-3 кб 2 163008 2647 15195 6385
3–6 КБ 2 159147 3811 2706 928

928

928

928

.В общей сложности 32 625 изоформ были признаны консенсусными изоформами, а затем изоформы были отшлифованы с помощью Quiver. Всего было отфильтровано 5628, 8810 и 1778 полированных изоформ из библиотек 1–2 kb, 2–3 kb и 3–6 kb соответственно (табл. 1). В конечном итоге мы получили 16 409 полированных изоформ и подвергли их биоинформатическому анализу. Из-за технических ограничений секвенирования PacBio в некоторых изоформах могут существовать одноосновные вставки или делеции. Данные последовательности с платформы Illumina полезны для исправления данных PacBio 33 .Кратковременные данные черешни, полученные с помощью платформы Illumina, были опубликованы вместе с геномом версии 1.0 (http://cherry.kazusa.or.jp/). Поэтому мы скорректировали наши данные на основе этих данных с коротким считыванием перед выполнением дальнейшего анализа, включая прогнозирование транспозонов и днРНК, классификацию изоформ, аннотацию генов и анализ AS (рис. 1).

Характеристика изоформ и аннотация генов

После получения набора из 16 409 неповторяющихся изоформ мы затем идентифицировали мобильные элементы (TE) среди них с помощью программного обеспечения RepeatMasker, которое классифицировало 166 изоформ как TE на основе таких признаков, как повторяющиеся последовательности.TE были разделены на шесть групп: 21 классифицировали как тип ДНК/шляпки, 32 — как длинные вкрапленные ядерные элементы (LINE), 7 — как длинные терминальные повторяющиеся элементы (LTR), 17 — как короткие вкрапленные ядерные элементы (SINE) и 79 в качестве элементов рРНК. Также было 10 предполагаемых МЭ других типов (рис. 2а).

Классификация изоформ

Рис. 2

a Идентификация и классификация мобильных элементов в последовательностях, определенных с помощью секвенирования PacBio. b Классификация изоформ по сравнению с файлом последовательности кодирующей области генома черешни. c Распределение последовательностей кодирующих областей, соответствующих более чем одному неизбыточному транскрипту. d Две изоформы c5390/f1p135/507 и c5422/f1p124/475 совпали с геном Pav_co4044289.1 , а черные линии представляют несовпадающую область. e Две изоформы c14252/f1p1/1541 и c17161/f1p1/1367 совпадали с Pav_sc0000044.1 , а черные линии представляют несовпадающую область. f Две изоформы c13658/f2p1/1544 и c13933/f1p1/1499 совпадали с Pav_sc0000103.1 , черные линии представляют несовпадающую область, а вертикальные красные линии представляют SNP между двумя изоформами.

Рис. 2

a Идентификация и классификация мобильных элементов в последовательностях, идентифицированных с помощью секвенирования PacBio. b Классификация изоформ по сравнению с файлом последовательности кодирующей области генома черешни. c Распределение последовательностей кодирующих областей, соответствующих более чем одному неизбыточному транскрипту. d Две изоформы c5390/f1p135/507 и c5422/f1p124/475 совпали с геном Pav_co4044289.1 , а черные линии представляют несовпадающую область. e Две изоформы c14252/f1p1/1541 и c17161/f1p1/1367 совпадали с Pav_sc0000044.1 , а черные линии представляют несовпадающую область. f Две изоформы c13658/f2p1/1544 и c13933/f1p1/1499 совпадали с Pav_sc0000103.1 , черные линии представляют несовпадающую область, а вертикальные красные линии представляют SNP между двумя изоформами.

Исключив 166 ТЕ, мы подвергли оставшиеся 16 243 изоформ дальнейшему анализу. Мы попытались классифицировать изоформы, сравнив их с геномом черешни (http://cherry.kazusa.or.jp/). Во-первых, мы извлекли последовательности кодирующих областей (экзоны + интроны) из генома черешни, используя сценарий Python. Всего было получено 43 673 различных нуклеотидных кодирующих последовательности, и изоформы из результатов PacBio сравнивались с этими последовательностями. Было обнаружено, что среди 43 673 последовательностей кодирующих областей 3438 соответствуют изоформам, идентифицированным с помощью секвенирования PacBio, с пороговым значением e < 10 -10 .Не все изоформы из длительного секвенирования соответствовали геномным последовательностям; 295 из 16 409 изоформ не соответствовали какой-либо последовательности кодирующей области. Затем с помощью анализа NCBI BLAST были идентифицированы 295 несовпадающих изоформ, 166 из которых считались последовательностями вируса вишни. Остальные 129 изоформ были аннотированы как предсказанные последовательности, включая 110 кодирующих последовательностей и 19 нкРНК. Эти 129 изоформ можно найти в разных местах хромосом черешни; однако они отсутствовали в базе данных стенограмм черешни (https://www.rosaceae.org/), из чего следует, что они могут быть недавно зарегистрированными транскриптами в пыльце черешни.

Мы разделили совпадающие изоформы на две группы: последовательности кодирующих областей, совпадающие только с одной изоформой (1563 члена, или 45%), и последовательности кодирующих областей, совпадающие более чем с одной изоформой (1875 членов, или 55%) (рис. 2b). . Во второй группе генетическое разнообразие могло быть причиной того, что последовательности кодирующих областей соответствовали нескольким изоформам PacBio, число которых обычно колебалось от 2 до 5 и в большинстве случаев опускалось ниже 50 (рис.2с). Мы обнаружили, что 7 последовательностей кодирующих областей соответствуют более чем 100 изоформам, что может быть связано с несколькими причинами. Например, существовало большое количество гомологичных генов, и каждый мог продуцировать различные транскрипты (рис. 2с).

Чтобы убедиться, что секвенированные изоформы могут быть амплифицированы, мы выбрали три многократно совпадающие последовательности кодирующих областей и амплифицировали изоформы PacBio с помощью ОТ-ПЦР в трех разновидностях «Rainer», «Lapins» и «21-21». Сравнение этих последовательностей с другими совпадающими последовательностями в некоторых случаях выявило SNP или вставки, что указывает на то, что они могут быть аллельными генами с разными аллелями или гомологичными генами в разных локусах.Например, для случайно выбранного гена Pav_co4044289.1 , который считается геном дефенсин-подобного белка 1, были обнаружены две разные изоформы, c5390/f1p135/507 и c5422/f1p124/475, с сходством последовательностей 67,12%. в каждом виде пыльцевой трубки. c5390/f1p135/507 располагался на хромосоме 1 (как Pav_co4044289.1 ), а c5422/f1p124/475 не мог быть локализован ни на одной из хромосом с 1 по 8. Интересно, что кодирующая последовательность длиной 113 п.н. была вставлена ​​в обе хромосомы. изоформ, и две изоформы могут быть амплифицированы из всех трех разновидностей, демонстрируя хорошую трансляционную способность, что указывает на то, что кодирующая ORF Pav_co4044289.1 был длиннее в пыльцевой трубке, чем в геноме (рис. 2г). Кроме того, было обнаружено, что две изоформы, c14252/f1p1/1541 и c17161/f1p1/1367, соответствуют Pav_sc0000044.1 , гену, связанному с инициацией транскрипции (Fig. 2e). Все три последовательности были обнаружены в пыльцевых трубках каждого из трех сортов, а две недавно идентифицированные изоформы, которые имели наибольшее сходство последовательностей, были расположены в одном и том же положении на хромосоме 7, что указывает на то, что они могут представлять гомологичные гены с одними и теми же аллелями или разные изоформы из одного локуса.Последним выбранным геном был Pav_sc0000103.1 , ген E3-убиквитин-протеинлигазы, подобный RING1. Среди двух изоформ у всех трех исследованных сортов черешни были обнаружены одна индель и два SNP (рис. 2е). Вместе эти результаты показали, что одномолекулярное секвенирование с длинным чтением может быть полезно для идентификации мРНК и кластеризации гомологов.

GO и KEGG анализ транскриптов пыльцевых трубок

Чтобы определить функции различных транскриптов в пыльцевых трубках черешни, мы аннотировали результаты длительного секвенирования с помощью NCBI BLASTn (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/), где 19,1% (3031) транскриптов могут быть аннотированы как транскрипты персика ( Prunus persica ), а 74,9% (11861) генов могут быть аннотированы как транскрипты сливы ( Prunus mune ). ) генов, предполагая тесную связь между этими генами у Rosaceae. Чтобы проанализировать изоформы на основе их функций с использованием аннотаций Gene Ontology (GO), мы сначала аннотировали их в базе данных eggNOR (http://eggnogdb.embl.de/#/app/home) 34 . Затем 15 836 аннотированных изоформ были аннотированы в соответствии с терминами GO и классифицированы WEGO (http://wego.genomics.org.cn/) 35 . В общей сложности 10 791 изоформа (69,1%) была аннотирована WEGO, а 7300, 9791 и 3285 изоформ были аннотированы по трем категориям биологических процессов, молекулярной функции и клеточного компонента (дополнительная таблица 2).

В категории «Клеточный компонент» аннотированные изоформы были разделены на 13 категорий (рис. 3). В тройку лучших категорий с наибольшим количеством генов вошли клетки, части клеток и мембраны, которые включали 1936, 1936 и 1320 изоформ соответственно.В категории «Молекулярная функция» аннотированные изоформы были разделены на 10 категорий (рис. 3). В первые три категории с наибольшим количеством генов вошли каталитическая активность, связывание и регулятор молекулярной функции, которые включали 6365, 5432 и 850 изоформ соответственно. В категории «Биологический процесс» аннотированные изоформы были разделены на 18 категорий (рис. 3). В тройку лучших категорий с наибольшим количеством генов вошли метаболический процесс, клеточный процесс и организация клеточного компонента или биогенез, которые включали 4696, 4556 и 1219 изоформ соответственно.

ГО анализ результатов транскриптома

Рис. 3

Количество изоформ в каждой категории GO, классифицированной WEGO.

Рис. 3

GO анализ результатов транскриптома

Количество изоформ в каждой категории GO, классифицированной WEGO.

Анализ пути KEGG также использовался для понимания экспрессии генов во время удлинения пыльцы. Всего в транскриптоме пыльцевых трубок обогащено 111 путей, в том числе 1517 генов.Среди этих путей 40 основных категорий показаны на рис. 4. Пять основных категорий включали метаболизм крахмала и сахарозы (ko00500), процессинг белков в эндоплазматическом ретикулуме (ko04141), метаболизм аминосахаров и нуклеотидов (ko00520), эндоцитоз (ko04144). и AMPK Signaling Pathway (ko04152), что указывает на то, что эти пути играют важную роль в удлинении пыльцевых трубок. Среди шести категорий, поскольку большинство изоформ были включены в две категории: метаболизм (352 изоформы) и обработка информации об окружающей среде (286 изоформ), мы сосредоточились на этих двух категориях (дополнительный рис.4а, б). Двадцать путей в категории «Метаболизм», включая гликолиз/глюконеогенез (ko00010), метаболизм фруктозы и маннозы (ko00051), расщепление валина, лейцина и изолейцина (ko00280), метаболизм сфинголипидов (ko00600), метаболизм крахмала и сахарозы и метаболизм аминосахаров и нуклеотидов, и двадцать путей в категории обработки информации об окружающей среде, включая сигнальный путь PI3K-Akt (ko04151), сигнальный путь MAPK (ko04010) и сигнальный путь mTOR (ko04150), а также сигнальный путь AMPK, были обогащены (дополнительный рис. .4а, б), указывая на то, что эти пути также играют важную роль в удлинении пыльцевых трубок.

KEGG-анализ результатов PacBio с использованием базы данных KEGG

Рис. 4

Гены были обогащены в различных категориях в анализе KEGG. В соответствии с расширенным числом генов показаны 40 лучших категорий, принадлежащих к шести классам. Ось x представляет процент обогащенных генов среди фоновых генов в различных категориях.

Рис. 4

KEGG-анализ результатов PacBio с использованием базы данных KEGG

Гены были обогащены в различных категориях в KEGG-анализе. В соответствии с расширенным числом генов показаны 40 лучших категорий, принадлежащих к шести классам. Ось x представляет процент обогащенных генов среди фоновых генов в различных категориях.

Анализ и идентификация AS

AS участвует в различных биологических процессах.Технология одномолекулярного длинного считывания обеспечивает более точный и эффективный способ идентификации событий АС, чем более ранние подходы к короткому считыванию 36 . В нашем исследовании мы сначала сопоставили результаты PacBio с геномом черешни, чтобы создать файл bam. Затем мы использовали программное обеспечение SpliceGrapher для прогнозирования четырех типов событий AS: альтернативный 5′, альтернативный 3′, пропуск экзона и сохранение интрона 37 (рис. 5а). Мы выявили в общей сложности 2243 события АС в четырех группах. Группа удержания интрона была основной группой, состоящей из 37 человек.58% событий АС (дополнительная таблица 3).

Анализ и проверка AS

Рис. 5

a Принципиальная схема четырех различных типов AS. b Четыре случайно выбранных гена: Pav_SC0000030.1_G920.1, Pav_SC0000030.1_G1320.1, Pav_SC0000554.1_G090.1 и Pav_SC0000349.1_G280.1 были амплифицированы с помощью RT-PCR, и представлены изображения продуктов, содержащих агарозные гели. левый. Схематическая диаграмма АС разных генов показана справа, а синие блоки представляют экзоны в разных генах.L лист, P пестик, Pt пыльцевая трубка.

Рис. 5

Анализ и проверка AS

a Схематическая диаграмма четырех различных типов AS. b Четыре случайно выбранных гена: Pav_SC0000030.1_G920.1, Pav_SC0000030.1_G1320.1, Pav_SC0000554.1_G090.1 и Pav_SC0000349.1_G280.1 были амплифицированы с помощью RT-PCR, и представлены изображения продуктов, содержащих агарозные гели. левый. Схематическая диаграмма АС разных генов показана справа, а синие блоки представляют экзоны в разных генах.L лист, P пестик, Pt пыльцевая трубка.

Чтобы проверить точность результатов, мы выбрали семь случайных генов с разными функциями из разных хромосом (таблица 2) и амплифицируем их с использованием специфических праймеров (дополнительная таблица 5). Результаты подтвердили, что все события AS в семи генах произошли в пыльцевых трубках всех трех сортов черешни (рис. 5b, дополнительная рис. 5). Например, ген Pav_SC0000030.1_G920.1, кодирующий бета-1,3-галактозилтрансферазу, располагался на хромосоме 1.Мы обнаружили, что в этом гене произошло событие пропуска экзона, при этом был пропущен третий экзон. Для гена Pav_SC0000030.1_G1320.1, расположенного на хромосоме 1, произошло событие задержки интрона. Для генов Pav_SC0000554.1_G090.1 и Pav_SC0000349.1_G280.1, расположенных на хромосоме 2 и 6, были идентифицированы событие удержания интрона и альтернативное 5′-событие (рис. 5б). Гены Pav_SC0000055.1_G560.1, Pav_SC0000087.1_G520.1 и Pav_SC0000348.1_G1070.1 локализованы на хромосомах 7, 6 и 7, и в этих генах обнаружены интронные ретенции, альтернативные 5′- и альтернативные 3′-события АС (рис. .5б, дополнительный рис. 5). Тот факт, что события АС происходили в разных видах пыльцевых трубок, указывает на то, что это общебиологическое явление у черешни. Это также показало, что доля сплайсинговых изоформ различается от гена к гену.

Таблица 2

Информация о генах, прошедших валидацию AS.

362

-36294690 Pav_SC0000087.1_G520.1
Идентификатор гена . Функция гена . Местоположение гена . Интервал локуса гена .+
Pav_SC0000030.1_G920.1 бета-1,3-галактозилтрансферазу 7 Chr1 36523773-36527728
Pav_SC0000030.1_G1320.1 флавонолов синтазы / flavanone 3-гидроксилазы Chr1
Pav_SC0000554.1_G090.1 гуанилилциклазов домена циклазы, содержащий 1 ChR2 20567898-20572852
Pav_SC0000349.1_G280.1 FRIGIDA-подобный белок 3 CHR6 15783383-15786743
Pav_SC0000055.1_G560.1 кальция унипорт белка CHR7 9851745-9854819
Нерастворимые бета-фруктофуранозидаза CHR6 5021693-5025107
Pav_SC0000348.1_G1070.1 актин-подобный белок CHR7 12942653-12945173
ChR2 20567898-20572852 CHR6 5021693-5025107
Джин ID . Функция гена . Местоположение гена . Интервал локуса гена . +
Pav_SC0000030.1_G920.1 бета-1,3-галактозилтрансферазу 7 Chr1 36523773-36527728
Pav_SC0000030.1_G1320.1 флавонолов синтазы / flavanone 3-гидроксилазы Chr1 362

-36294690
Pav_SC0000554.1_G090.1 домен гуанилатциклазы, содержащий 1
Pav_SC0000349.1_G280.1 FRIGIDA-подобный белок 3 CHR6 15783383-15786743
Pav_SC0000055.1_G560. 1 кальция унипорт белка CHR7 9851745-9854819
Pav_SC0000087.1_G520.1 Нерастворимые бета-фруктофуранозидаза
Pav_SC0000348.1_G1070.1 Актиноподобный белок Chr7 12942653-12945173

Идентификатор гена . Функция гена . Местоположение гена . Интервал локуса гена .
PAV_SC0000030.1_G920.1 Beta-1,3-галактозилтрансфераза 7 Chr1 36523773-36527777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777н.1_G1320.1 флавонолов синтазы / flavanone 3-гидроксилазы Chr1 362

-36294690
Pav_SC0000554.1_G090.1 домен гуанилатциклазы, содержащий 1 ChR2 20567898-20572852
Pav_SC0000349. 1_G280.1 FRIGIDA-подобный белок 3 CHR6 15783383-15786743
Pav_SC0000055.1_G560.1 кальция унипорт белка CHR7 9851745-9854819
Pav_SC0000087.1_G520.1 Нерастворимые бета-фруктофуранозидаза CHR6 5021693-5025107
Pav_SC0000348.1_G1070.1 актин-подобный белок CHR7 12942653-12945173
Chr1 362

-36294690
Джин ID . Функция гена . Местоположение гена . Интервал локуса гена .
Pav_SC0000030.1_G920.1 Бета-1,3-галактозилтрансферазу 7 Chr1 36523773-36527728
Pav_SC0000030.1_G1320.1 флавонолов синтазы / flavanone 3-гидроксилазы
Pav_SC0000554.1_G090.1 гуанилилциклазами домен циклаза, содержащий 1 ChR2 20567898-20572852
Pav_SC0000349.1_G280.1 FRIGIDA-подобный белок 3 CHR6 15783383-15786743
Pav_SC0000055 .1_G560.1 кальция унипорт белка CHR7 9851745-9854819
Pav_SC0000087.1_G520.1 Нерастворимые бета-фруктофуранозидаза CHR6 5021693-5025107
Pav_SC0000348.1_G1070.1 Актиноподобный белок Chr7 12942653-12945173

AS иногда ограничивается определенными тканями 36 . Чтобы определить, существуют ли также тканеспецифические события АС у черешни, мы дополнительно обнаружили события АС семи генов в пестике и листе (рис.5б, дополнительный рис. 5). Мы наблюдали различия в AS между тканями. Например, ген Pav_sc0000030.1_G920.1 показал разницу в предпочтении сплайсинга между пестиком и пыльцевой трубкой. Другие гены, пораженные АС, такие как Pav_SC0000030.1_G1320.1, Pav_SC0000554.1_G090.1, Pav_SC0000349.1_G280.1 и Pav_SC0000055.1_G560.1, также показали тканеспецифический АС. В частности, Pav_SC0000030.1_G1320.1, кодирующий белок, участвующий в синтезе флавонолов, подвергался АС только в пыльцевых трубках, что свидетельствует о том, что его белковый продукт может играть специфическую роль в пыльцевых трубках черешни.Для гена Pav_SC0000348.1_G1070.1, хотя событие AS произошло в пестике, листе и пыльцевой трубке, уровень экспрессии изоформ, продуцируемых из гена, различался в разных тканях.

Анализ и идентификация днРНК

Важность LncRNAs была признана только недавно, и они ранее не изучались в пыльцевых трубках черешни. Таким образом, мы затем проверили вероятные последовательности lncRNA в наших данных. Поскольку длина днРНК должна быть больше 200 нуклеотидов, мы сначала наблюдали длину наших транскриптов и обнаружили, что длина самого короткого транскрипта составляет 308 нуклеотидов.Затем все транскрипты были подвергнуты поиску BLAST по базе данных NCBI-nt для идентификации аннотированных днРНК, и всего было идентифицировано 130 днРНК. Чтобы получить больше сигналов днРНК из наших данных, мы затем удалили из наших данных домашние последовательности тРНК и рРНК, подобные днРНК, и провели скрининг днРНК-кандидатов в соответствии с двумя критериями: открытая рамка считывания (ORF) менее 200 пар оснований и кодирующий потенциал. менее 0,1. Сначала мы определили кодирующий потенциал каждой изоформы с помощью программного обеспечения CPAT 38 .Среди всех обнаруженных транскриптов большинство (13460) показали кодирующий потенциал в диапазоне 0,9–1,0; 2118 последовательностей показали кодирующий потенциал в диапазоне 0,1–0,9, и только 620 транскриптов показали кодирующий потенциал менее 0,1 (дополнительная рис. 6a). Кроме того, мы обнаружили, что большинство транскриптов содержали относительно длинную ORF (500–4500 п.н.), в то время как 250 имели очень короткие ORF менее 200 п.н. (дополнительная рис. 6b). На основании этих данных 206 транскриптов из пыльцевых трубок были признаны кандидатами в днРНК (рис.6а). Сравнение с днРНК, идентифицированными с помощью анализа BLAST, выявило 154 вновь идентифицированных днРНК. Таким образом, мы идентифицировали 284 днРНК. Сравнение с базой данных NONCODE (http://www.noncode.org/) показало, что 139 были включены в NONCODE, а 145 не были найдены; последняя группа считалась представляющей новые lncRNAs, уникальные для черешни (Fig. 6b).

Предсказание и статистика LncRNA и поиск комплементарных генов

Рис. 6

a Скрининг LncRNA на основе кодирующего потенциала и длины ORF. b Классификация известных и неизвестных днРНК. c Классификация интронных, межгенных и NAT-днРНК. d Геномные местоположения пяти случайно выбранных днРНК и их комплементарных генов показаны на диаграмме.

Рис. 6

Предсказание и статистика LncRNA и поиск комплементарных генов

a Скрининг LncRNA на основе кодирующего потенциала и длины ORF. b Классификация известных и неизвестных днРНК. c Классификация интронных, межгенных и NAT-днРНК. d Геномные местоположения пяти случайно выбранных днРНК и их комплементарных генов показаны на диаграмме.

LncRNAs обладают разнообразными функциональными характеристиками на молекулярном уровне; одна общая модель состоит в том, что lncRNAs действуют как NAT, которые регулируют уровни экспрессии комплементарных генов 21 . Чтобы выяснить, существует ли аналогичный процесс в пыльцевых трубках черешни, мы затем проверили комплементарную последовательность каждой идентифицированной lncRNA.Мы обнаружили, что 154 lncRNAs из пыльцевых трубок имеют последовательности, комплементарные генам с высоким кодирующим потенциалом, что указывает на то, что они могут действовать как NAT. Дополнительные гены с функциональными аннотациями перечислены в дополнительной таблице 4, и некоторые из дополнительных генов соответствуют множественным NAT. Общее количество комплементарных генов составило 54, а количество совпадений для каждого комплементарного гена указано в дополнительной таблице 4. В дополнение к NAT, lncRNAs могут быть расположены в интронных или межгенных местах.Следовательно, мы провели анализ, чтобы подтвердить расположение остальных lncRNAs. Мы обнаружили, что 22 днРНК располагались в интронных позициях, а остальные 108 располагались в межгенных позициях (рис. 6в).

Затем мы выбрали пять NAT-lncRNAs и их комплементарные гены для последующего анализа. Были известны две из этих NAT-днРНК, c14136/f1p34/1694 и c4832/f1p61/1561, которые были смысловыми последовательностями и располагались в разных положениях на хромосоме 7. Их комплементарные гены могли кодировать белки S-ацилтрансферазы и актина. , соответственно (рис.6г). Остальные три (c18739/f1p1/1392, c13726/f1p1/1261 и c21810/f1p2/1391) были недавно идентифицированными NAT-lncRNAs с антисмысловыми последовательностями на хромосомах 7, 5 и 4 соответственно (рис. 6d). Их комплементарные гены могут кодировать серин/треонин-протеинфосфатазу, фосфатидилинозитол-4-киназу и полигалактуроназоподобный белок. Комплементарные последовательности NAT-lncRNA были идентифицированы как последовательности, кодирующие белки с различными функциями. Анализ BLAST с использованием этих NAT-днРНК и их комплементарных генов в качестве запросов к геному черешни показал, что каждая из днРНК и группы комплементарных им генов были расположены только в одном положении, что также указывало на то, что NAT-днРНК транскрибировались в обратном направлении. комплементарных генов и могут быть NAT-днРНК каждой комплементарной мРНК (рис.6г).

Функциональная идентификация NAT-днРНК и их комплементарных генов в пыльце черешни

Чтобы подтвердить надежность высокопроизводительного секвенирования, мы обнаружили последовательности пяти NAT-lncRNAs и их комплементарные последовательности с помощью анализа RT-PCR (рис. 7a). Сначала мы выделили РНК из пыльцевых трубок трех разных сортов черешни, ‘Rainer’, ‘Lapins’ и ‘21-21’, а затем обнаружили пять днРНК и их комплементарные последовательности с помощью анализа ОТ-ПЦР.Все транскрипты NAT-lncRNAs и их комплементарных генов соответствовали результатам секвенирования (рис. 7a), что указывает на высокую надежность анализа.

Клонирование и qRT-PCR анализ днРНК и их комплементарных генов

Рис. 7

a ОТ-ПЦР днРНК и их комплементарных генов в трех вариантах. b f Анализ qRT-PCR, показывающий уровни экспрессии днРНК и их комплементарных генов в ‘Rainer’ и ‘21-21’, когда днРНК подавляли антисмысловой трансфекцией.*Стьюдент t — тест: P  < 0,05, бар: SD. 14136: c14136/f1p34/1694, S-ацилтрансфераза 1, 18739: c18739/f1p1/1392, STPP: серин/треонин-протеинфосфатаза, 13726: c13726/f1p1/1261, PP4K: фосфатидилинозитол, 48-2: c4832/f1p61/1561, 21810: c21810/f1p2/1391, PGL: полигалактуроназоподобный. г Состояние роста пыльцевых трубок различных сортов черешни при подавлении днРНК c4832/f1p61/1561.

Рис. 7

Клонирование и qRT-PCR анализ lncRNAs и их комплементарных генов

a RT-PCR lncRNAs и их комплементарных генов в трех вариантах. b f Анализ qRT-PCR, показывающий уровни экспрессии днРНК и их комплементарных генов в ‘Rainer’ и ‘21-21’, когда днРНК подавляли антисмысловой трансфекцией. *Стьюдент t — тест: P  < 0,05, бар: SD. 14136: c14136/f1p34/1694, S-ацилтрансфераза 1, 18739: c18739/f1p1/1392, STPP: серин/треонин-протеинфосфатаза, 13726: c13726/f1p1/1261, PP4K: фосфатидилинозитол, 48-2: c4832/f1p61/1561, 21810: c21810/f1p2/1391, PGL: полигалактуроназоподобный. г Состояние роста пыльцевых трубок различных сортов черешни при подавлении днРНК c4832/f1p61/1561.

Согласно предыдущим исследованиям, NAT-lncRNAs положительно или отрицательно регулируют экспрессию своих смысловых транскриптов, используя различные транскрипционные или посттранскрипционные механизмы 39 . Чтобы изучить взаимосвязь между NAT-lncRNAs и их комплементарными транскриптами генов, были проведены анализы антисмысловой трансфекции для подавления уровней экспрессии пяти NAT-lncRNAs, а затем для обнаружения экспрессии комплементарных транскриптов NAT-lncRNA.Для NAT-днРНК c14136/f1p34/1694, c18739/f1p1/1392 и c13726/f1p1/1261, когда уровни их экспрессии подавлялись антисмысловой трансфекцией, их комплементарные гены подавлялись в разной степени (рис. 7b–d). . Однако, когда NAT-lncRNA c4832/f1p61/1561 подавлялась антисмысловой трансфекцией, ее комплементарный ген активировался (Fig. 7e). После подавления NAT-днРНК c21810/f1p2/1391 с помощью антисмысловой трансфекции мы обнаружили, что экспрессия комплементарного транскрипта, полигалактуроназоподобного гена, не изменилась, что означает, что эта NAT-днРНК может не обладать способностью регулировать его комплементарный ген (рис.7е). Эти результаты предполагают, что разные NAT могут по-разному регулировать свои комплементарные гены.

Поскольку c4832/f1p61/1561 комплементарен гену актина, мы стремились наблюдать за условиями роста пыльцевых трубок у различных сортов черешни и определить, повлияет ли замалчивание c4832/f1p61/1561 на морфологию пыльцевых трубок или нет. Когда NAT-днРНК c4832/f1p61/1561 была подавлена, 62,0% и 68,5% пыльцевых трубок сортов ‘Rainer’ и ‘21-21’ показали аномальный рост соответственно.Однако при имитационной обработке только 3% и 5,7% пыльцевых трубок сортов «Райнер» и «21-21» показали аномалии соответственно (рис. 7ж). Эти результаты предполагают, что c4832/f1p61/1561 может регулировать условия роста пыльцевых трубок через гены актина.

Обсуждение

Поскольку черешня является одним из самых популярных коммерческих фруктовых деревьев во всем мире, крупномасштабная молекулярная селекция этого вида может быть полезным средством создания новых сортов и внесения вклада в индустрию черешни.Высокопроизводительное секвенирование геномов и транскриптомов может дать большие объемы данных, а технология секвенирования с длинным чтением полезна для секвенирования всего генома и анализа кДНК 5,7,40 ; однако об исследованиях с использованием этой технологии на черешне ранее не сообщалось.

В этом исследовании мы получили полноразмерные транскрипты пыльцевых трубок черешни с использованием платформы PacBio RS II. При анализе изоформ 3438 из 43 673 последовательностей кодирующих областей, извлеченных из генома черешни, совпали с изоформами, обнаруженными в результатах PacBio.Таким образом, мы подтвердили, что эти специфические гены экспрессируются в пыльцевых трубках. Кроме того, 129 идентифицированных изоформ не соответствовали ни одной транскрибируемой последовательности и, следовательно, казались новыми. В исследованиях, связанных с секвенированием длинных транскриптов кукурузы и хлопка ( Gossypium hirsutum ) 5,36 , большое количество новых транскриптов было идентифицировано путем сравнения с эталонными геномами кукурузы и хлопка соответственно. Эти результаты показали, что длинное секвенирование полезно для идентификации новых изоформ или генов.Тем не менее, наш подход обогатил данные для неперекрывающихся изоформ и обеспечил более полный транскриптом пыльцевых трубок. Чтобы дополнительно выяснить функции различных транскриптов в пыльцевых трубках черешни, наши данные были сначала аннотированы с использованием базы данных WEGO (рис. 3), и было обнаружено, что 40 терминов GO были обогащены. Мы обнаружили, что 6365 генов были обогащены термином каталитической активности GO (GO: 0003824), что позволяет предположить, что эти гены играют очень важную роль во время роста пыльцевых трубок.Чтобы лучше понять механизм удлинения пыльцевых трубок, мы затем аннотировали наши данные, используя базу данных KEGG (рис. 4). Пути категорий метаболизма и переработки информации об окружающей среде были обогащены в транскриптоме пыльцевых трубок черешни. Пути, связанные с метаболизмом крахмала, сахаров и аминокислот, и некоторые пути передачи сигналов были включены в эти обогащенные пути, что указывает на то, что эти пути играют важную роль в удлинении пыльцевых трубок.Мало что известно об АС у черешни. Почти 40% идентифицированных событий AS связаны с задержкой интронов, что согласуется с аналогичным анализом других видов растений, показывающим, что задержка интронов составляет большой процент событий AS у растений 41,42 . После того, как мы идентифицировали семь событий AS среди генов пыльцевых трубок, мы обнаружили, что два гена могут участвовать в ионном обмене или удлинении пыльцевых трубок. Pav_SC0000055.1_G560.1 и Pav_SC0000348.1_G1070.1 кодируют белок-унипортер кальция и актиноподобный белок соответственно.Ионы кальция необходимы для прорастания пыльцевых трубок 43 , а кальциевые uniporter белки функционируют как часть транспортеров внутренней мембраны Ca 2+  44 . Наблюдение альтернативного сплайсинга Pav_SC0000055.1_G560.1 предполагает, что он может быть вовлечен в процесс роста пыльцевых трубок посредством неизвестного механизма. Белок актин может формировать часть цитоскелета пыльцевой трубки и может быть тесно связан с удлинением пыльцевой трубки 45 .Однако функция актиноподобного белка не ясна, и наблюдение AS для этого гена указывает на необходимость дальнейшего изучения его функции в росте пыльцевых трубок. Хотя мы не обнаружили всех предсказанных событий АС и не выяснили функции АС в пыльцевой трубке черешни, мы подтвердили, что АС встречается у черешни и иногда является тканеспецифическим.

Идентификация и анализ lncRNAs являются ключевым вкладом в наше исследование, которое выявило тканеспецифическую экспрессию и низкие уровни экспрессии по сравнению с кодирующими генами 5,21 .Тот факт, что некоторые днРНК и мРНК имеют одинаковую структуру, такую ​​как поли-А-хвосты, сайты начала транскрипции (TSS) и сайты терминации транскрипции (TTS), затрудняет подтверждение идентичности днРНК, что приводит к недостаткам в предсказании днРНК 46 –50 . В этом исследовании было предсказано 284 днРНК, и мы определили, что 139 из этих днРНК были новыми. LncRNAs локализуются либо в ядре клетки, либо в цитоплазме и регулируют экспрессию генов на транскрипционном или посттранскрипционном уровне путем связывания с нуклеотидами, такими как комплементарная РНК, гомологичная ДНК и микроРНК, или с белками, такими как гистоны или факторы транскрипции 49 .

Процесс, посредством которого днРНК связываются с белками, трудно предсказать — требуется биохимический подход, такой как анализы иммунопреципитации РНК (RIP) или фотоактивируемого рибонуклеозид-усиленного перекрестного связывания и иммунопреципитации (PAR-CLIP) 51 , а также скрининг днРНК на предмет способность функционировать как естественные антисмысловые последовательности транскриптов (NAT), комплементарные мРНК, может быть значительно облегчена с помощью биоинформатического анализа. Поэтому мы провели скрининг на функцию NAT и успешно идентифицировали значительное количество lncRNAs, которые действуют как NAT (154).Были проанализированы функции комплементарных генов NAT, и гены, связанные с убиквитином, такие как регуляторная субъединица 10 протеасомы 26S, не являющаяся АТФазой, убиквитин-протеинлигаза E3, подобная RHF2A, тубби-подобный белок F-box 5 и вероятный убиквитин E3. -протеинлигаза ARI2, что указывает на то, что NAT-lncRNAs могут регулировать систему убиквитина во время роста пыльцевой трубки (дополнительная таблица 4). Мы также идентифицировали гены, такие как S-ацилтрансфераза 1, фосфатидилинозитол-4-киназа, полигалактуроназоподобная и серин/треонин-протеинфосфатаза, что позволяет предположить, что NAT могут участвовать в основных физиологических реакциях во время удлинения пыльцевой трубки (дополнительная таблица 4).Эти результаты указывают на общий паттерн функции NAT-lncRNA в пыльце. Хотя мы обнаружили некоторую связь между NAT-lncRNAs и мРНК, которые кодируют белки, необходим дальнейший анализ, чтобы подтвердить, действительно ли NAT-lncRNAs регулируют экспрессию генов или влияют на биологические процессы в пыльцевых трубках. Таким образом, для дальнейшего исследования использовали анализ антисмысловой трансфекции, и было показано, что NAT-lncRNAs действительно могут регулировать свои комплементарные кодирующие гены. Кроме того, мы обнаружили, что одна NAT-lncRNA может участвовать в регуляции гена актина, влияя на условия роста пыльцевых трубок, что позволяет предположить, что NAT-lncRNAs могут влиять на некоторые процессы, основанные на РНК, при росте пыльцевых трубок черешни.Из-за технических ограничений недавно идентифицированный неполиаденилированный класс NAT-lncRNAs не мог быть обнаружен среди наших результатов. Тем не менее, наше исследование дает полезную информацию о транскриптоме пыльцевых трубок черешни; исчерпывающая информация, представленная здесь, должна улучшить наше понимание мужского гаметогенеза черешни и может послужить ориентиром для будущих исследований пыльцевых трубок черешни.

Материалы и методы

Растительные материалы

Сорта черешни ‘Rainer’, ‘Lapins’ и ‘21-21’ выращены в Пекинской академии сельского и лесного хозяйства.‘21-21’ – потомство самоопыляемых ‘Lapins’. Пыльники каждого сорта собирали, когда цветки только начинали раскрываться. Затем пыльники осторожно отделяли от нитей и обезвоживали до выделения пыльцевых зерен.

Подготовка проб и выделение РНК

Пыльцевые зерна каждого сорта суспендировали в жидкой среде для прорастания, содержащей 10 % (масса/объем) сахарозы, 0,01 % (масса/объем) H 3 BO 3 и 0,015 % (масса/объем) CaCl 2 .Через 3 ч культивирования при комнатной температуре определяли скорость прорастания пыльцы. Затем жидкую среду для прорастания удаляли пипеткой, а пыльцу трижды промывали буфером PBS. Листья и пестики каждого сорта также отбирали в период цветения и хранили при температуре -80 °C. РНК экстрагировали из образцов пыльцы, листьев и пестика с использованием набора EASY Spin Plus Plant RNA Kit (RN40, Aidlab Company, Пекин, Китай) и хранили при -80°C.

Подготовка библиотеки и секвенирование PacBio

RIN (номера целостности РНК) РНК пыльцевых трубок «Rainier», «Lapins» и «21-21» были равны 9.2, 9,0 и 9,3 соответственно. Один микрограмм РНК из пыльцевых трубок каждого сорта смешивали в качестве образца для построения библиотеки. Образцы РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора для синтеза кДНК Clontech SMARTer (фирма TaKaRa) в отдельных пробирках для ПЦР. Для получения кДНК FL со штрих-кодом параллельно проводили три реакции RT. Оптимизацию ПЦР проводили для определения оптимального количества циклов амплификации для последующих крупномасштабных ПЦР-анализов. Один праймер (праймер IIA из набора Clontech SMARTer: 5′-AAG CAG TGG TAT CAA CGC AGA GTA C-3′) использовали для всех реакций амплификации после RT.Продукты крупномасштабной ПЦР очищали с помощью гранул AMPure PB, а контроль качества (КК) выполняли на биоанализаторе 2100 (Agilent). Фракции разного размера, элюированные в ходе цикла, подвергали контролю качества и объединяли в эквимолярных соотношениях для последующей повторной амплификации с получением трех библиотек (1–2, 2–3, 3–6). В общей сложности 6 клеток SMRT (дополнительная таблица 1) были секвенированы на платформе PacBio RS II с использованием химии P6-C4 с 3–4-часовыми фильмами в Tianjin Biological Chip Technology Company.

Программное обеспечение для анализа SMRT (версия: smrtanalysis_2.3.0.140936.p4.150482) использовали для идентификации конечных изоформ из необработанных считываний. Сначала необработанные чтения были преобразованы в чтения вставок с исправлением ошибок с minFullPass = 0 и minPredictedAccuracy = 0,80. Затем определяли полноразмерные нехимерные (FLNC) транскрипты путем поиска сигнала полиА-хвоста и 5′- и 3′-праймеров кДНК. Для получения консенсусных изоформ использовали итеративную кластеризацию для исправления ошибок (ICE). Неполноразмерные последовательности использовали для фильтрации согласованных последовательностей изоформ с помощью программного обеспечения Quiver для получения полированных изоформ, и параметр был установлен на 0.99. Полноразмерные и неполноразмерные прочтения были сопоставлены с геномом черешни с использованием программы картирования и выравнивания генома (GMAP) 52 . Затем вставки и несоответствия были исправлены с использованием эталонного генома черешни.

Классификация изоформ, аннотация изоформ и предсказание AS

Файл последовательности кодирующей области для генома черешни был извлечен с помощью скрипта Python, а затем с использованием программного обеспечения ClustalW было выполнено выравнивание последовательностей между кодирующими последовательностями и изоформами из наших данных секвенирования (https://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) 53 с пороговым значением e 1e-10. Для проверки результатов выравнивания геномную ДНК выделяли из свежих листьев сортов «Rainer», «Lapins» и «21-21» с использованием набора для выделения геномной ДНК на спиновой колонке EZ (Biomega Inc., Фостер-Сити, Калифорния). как описано ранее 54 . Также были получены РНК пыльцевых трубок трех разновидностей, и кДНК были получены с использованием праймера OligodT. Шесть выбранных изоформ PacBio сравнивали с соответствующими последовательностями кодирующих областей с помощью программного обеспечения DNAMAN (версия 7.0.2.176). Специфические праймеры для c5390/f1p135/507 и c5422/f1p124/475 были разработаны для амплификации их целых изоформ. Консервативные праймеры были разработаны для амплификации изоформ c14252/f1p1/1541 и c17161/f1p1/1367, а также изоформ c13658/f2p1/1544 и c13933/f1p1/1499. Были проведены эксперименты ПЦР на уровне ДНК и РНК, и продукты были секвенированы с помощью секвенирования по Сэнгеру для обнаружения вариаций последовательности, таких как SNP и вставки. Праймеры перечислены в дополнительной таблице 5.

Для аннотации изоформ изоформы были сначала аннотированы NCBI BLASTn (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/) 55,56 с пороговым значением e 1e-10. Для анализа обогащения GO и KEGG данные изоформ были сначала аннотированы в эукариотической базе данных eggNOG (версия: 1.0.3), а затем для обогащения использовалось программное обеспечение WEGO 2.0 (http://wego.genomics.org.cn/). гены в разных категориях GO. База данных KEGG (https://www.kegg.jp) использовалась для обогащения генов различными терминами KEGG. Аннотацию KEGG генома черешни использовали для фоновых терминов KEGG.

Для анализа АС результаты PacBio сначала были сопоставлены с геномом черешни с помощью программного обеспечения GMAP для создания файлов bam, а затем был проведен анализ АС с помощью программного обеспечения SpliceGrapher (http://splicegrapher.sourceforge.net/) 37 . Для анализа потребовались как файлы bam после сопоставления, так и файлы последовательности регионов кодирования из наших данных. Для проверки также использовали кДНК пыльцевых трубок трех исследованных сортов. Конкретные праймеры для каждого события АС были разработаны так, чтобы покрывать сайт сплайсинга. Праймеры перечислены в дополнительной таблице 5.

Длина каждой изоформы была рассчитана с помощью скрипта Python и NCBI BLASTn (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/) использовали для идентификации аннотированных днРНК с пороговым значением е-10. Вспомогательные нкРНК, такие как рРНК и тРНК, удаляли из оставшихся изоформ, а потенциал кодирования определяли с помощью программного обеспечения Coding-Potential Assessment Tool (CPAT). Длину ORF в каждой изоформе также определяли с помощью программного обеспечения ORF (http://embossgui.sourceforge.net/demo/getorf.html) 57 . Затем были отобраны кандидатуры. Окончательные днРНК-кандидаты сравнивали с предыдущим набором данных (http://www.noncode.org/) и нанесены на карту генома (https://www.rosaceae.org/). Чтобы протестировать NAT в полученных днРНК, комплементарные последовательности днРНК сначала получали с помощью скрипта Python, а затем использовали программное обеспечение ClustalW для выравнивания полученных последовательностей и транскриптов после удаления служебных нкРНК с отсечкой e- значение 1e-10.

Для проверки предсказания днРНК и NAT были обнаружены пять случайно выбранных днРНК и их комплементарные кодирующие мРНК. Суммарную РНК из пыльцевых трубок разных сортов черешни выделяли с помощью набора EASY spin Plus Plant RNA (RN40, Aidlab Company, Пекин, Китай).Конкретные праймеры были разработаны для обратной транскрипции днРНК и их комплементарных последовательностей в различных реакциях для синтеза первой цепи кДНК. Затем были проведены эксперименты ПЦР со специфическими праймерами, которые перечислены в дополнительной таблице 5.

Эксперименты с антисмысловыми олигонуклеотидами

Эксперименты с антисмысловыми олигонуклеотидами проводились в основном так, как описано ранее 58 . Был синтезирован фосфоротиоированный антисмысловой олигодезоксинуклеотид (as-ODN) (Sangon Biotech Co., Ltd., Пекин, Китай) для подавления экспрессии генов. Для трансфекции 20 мкл (10 пмоль) олигонуклеотидов (as-ODN), 28 мкл цитофектинового буфера и 4 мкл цитофектина предварительно смешивали и немедленно добавляли к 200 мкл среды для прорастания. Через два часа собирали пыльцевые трубки для выделения РНК. Эту же смесь без олигонуклеотидов использовали в качестве контроля. Антисмысловые олигодезоксинуклеотиды для экспериментов с антисмысловыми олигонуклеотидами перечислены в дополнительной таблице 5.

Анализ LncRNA и NAT методом ПЦР в реальном времени

Общая РНК пыльцевых трубок была извлечена из различных сортов черешни с использованием набора EASY spin Plus Plant RNA (RN40, Aidlab Company, Пекин, Китай).Первую цепь кДНК синтезировали с использованием праймеров oligo-dT и различных специфических праймеров с одинаковым содержанием РНК. ПЦР в реальном времени проводили с использованием SuperReal PreMix Plus (зеленый SYBR) (TianGen Biotech Company) и в условиях, описанных выше. Относительное содержание РНК рассчитывали методом 2-ΔΔCT, референсным геном считали ген убиквитина черешни. Праймеры для ПЦР в реальном времени перечислены в дополнительной таблице 5.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (31272123) и Национальным научным фондом молодых ученых Китая (31601726).Мы хотели бы поблагодарить компанию Beijing Qinglian Biotech Company за помощь в обогащении KEGG.

Авторские вклады

Ю.Л., К.З. и Т.Л. задумал планы исследований; Ю.Л. провел большую часть экспериментов; C.W., C.L., J.Y., X.D., W.F., J.W., X.Z. и Г.Ю. выполнил остальные эксперименты; Ю.Л. и Т.Л. проанализировали данные; Ю.Л., К.З. и Т.Л. написал статью.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Каталожные номера

1.

Уильямс

,

J H

и

Риз

,

J B

.

Эволюция развития производительности пыльцы

.

Курс. Темы Дев. биол.

131

.

299

336

(

2019

).2.

Гуань

,

Y

,

Го

,

J

,

Ли

,

H

,

Ян

,

Z

.

Передача сигналов при росте пыльцевых трубок: перекрестные помехи, обратная связь и недостающие звенья

.

мол. Завод

(

2013

)

6

,

1053

1064

3842152 3.

Чжоу

,

Z

и др.

Arabidopsis RIC1 разрезает актиновые филаменты на верхушке, чтобы регулировать рост пыльцевых трубок

.

Plant Cell,

(

2015

)

27

,

1140

4558691 одна тысяча сто шестьдесят-один 4.

Лорейн,

А.Е.

,

Маккормик

,

S

,

Эстрада

,

,

Пател

,

К

,

Цинь

,

П

.

Секвенирование РНК пыльцы Arabidopsis раскрывает новую транскрипцию и альтернативный сплайсинг

.

Физиол растений.

(

2013

)

162

,

1092

1109

3668042 5.

Vogel

,

H

,

BADAPANDA

,

C

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

. А

.

Анализ РНК-секвенирования выявил у пыльцевого жука Meligethes aeneus

многочисленные гены, специфичные для стадии развития и связанные с иммунитетом.

Насекомое Мол. биол.

(

2014

)

23

,

98

112

6.

Хуанг

,

L

и др.

Систематическая идентификация длинных некодирующих РНК во время развития пыльцы и оплодотворения у Brassica rapa

.

Завод J.

(

2018

)

96

,

203

222

7.

Han

,

Y

и др.

Транскриптомный анализ дифференциально экспрессируемых генов в цветочных почках генетически мужских стерильных огурцов и огурцов дикого типа с помощью секвенирования РНК

.

Физиол. Мол. биол. Растения

(

2018

)

24

,

359

367

5

0 8.

Wang

,

B

и др.

Выявление сложности транскриптома кукурузы с помощью долговременного секвенирования одной молекулы

.

Нац. коммун.

(

2016

)

7

4931018 9.

Correia

,

S

,

Schouten

,

R

,

Silva

,

AP

,

Goncalves

,

B

.

Факторы, влияющие на качество и полезные для здоровья вещества во время роста и послеуборочного периода черешни (Prunus avium L.)

.

Фронт. Растениевод.

(

2017

)

8

,

2166

5742238 10.

Ширасава

,

К

и др.

Последовательность генома черешни (Prunus avium) для использования в селекции с помощью геномики

.

Рез.ДНК.

(

2017

)

24

,

499

508

5737369 11.

ONO

,

K

,

AKAGI

,

T

,

Morimoto

,

T

,

Wunsch

,

A

,

TAO

,

R

.

Повторное секвенирование генома различных особей черешни (Prunus avium) выявило мутацию гена-модификатора, придающую части пыльцы самосовместимость

.

Физиология клеток растений.

(

2018

)

59

,

1265

1275

12.

Черный

,

DL

.

Механизмы альтернативного сплайсинга пре-мессенджерной РНК

.

год. Преподобный Биохим.

(

+2003

)

72

,

291

336

13. Лопес-Бигас

,

Н

,

аудит

,

В

,

Ouzounis

,

С

,

Парра

,

G

,

Гиго

,

R

.

Являются ли мутации сплайсинга наиболее частой причиной наследственных заболеваний?

ФЭБС Письмо.

(

2005

)

579

,

1900

1903

14.

Чжан

,

G

и др.

Глубокое секвенирование РНК с разрешением одной пары оснований выявило высокую сложность транскриптома риса

.

Рез. генома.

(

2010

)

20

,

646

— 654

2860166 15.

Marquez,

Y

,

Коричневый

,

JW

,

Simpson

,

C

,

Барта

,

А

,

Калина

,

М

.

Анализ транскриптома показывает повышенную сложность ландшафта альтернативного сплайсинга у Arabidopsis

.

Рез. генома.

(

2012

)

22

,

1184

1195

3371709 16.

Li

,

P

и др.

Динамика развития транскриптома листьев кукурузы

.

Нац. Жене.

(

2010

)

42

,

1060

1067

17.

Lee

,

JH

и др.

Регуляция чувствительного к температуре цветения репрессорами фактора транскрипции MADS-box

.

Science

(

2013

)

342

,

628

632

18.

LIN

,

F

,

Zhang

,

Y

,

Jiang

,

My

.

Альтернативный сплайсинг и дифференциальная экспрессия двух транскриптов гена никотинадениндинуклеотидфосфатоксидазы B из Zea mays

.

Дж. Интегр. биол. растений

(

2009

)

51

,

287

298

19.

Rinn

,

JL

,

Chang

,

HY

.

Регуляция генома длинными некодирующими РНК

.

год. Преподобный Биохим.

(

2012

)

81

,

145

166

20.

Коричневый

,

CJ

и др.

Ген XIST человека: анализ неактивной X-специфичной РНК длиной 17 т.п.н., которая содержит консервативные повторы и высоко локализована в ядре

.

Cell

(

1992

)

71

,

527

542

21.

Liu

,

J

,

Wang

,

H

,

Chua

,

NH

.

Длинный некодирующий транскриптом РНК растений

.

Завод Биотехнолог. J.

(

2015

)

13

,

319

328

22.

Liu

,

TT

и др.

Глобальная идентификация и анализ малых ядрышковых РНК и возможных некодирующих РНК среднего размера у Oryza sativa

.

мол. Завод

(

2013

)

6

,

830

846

23.

Ван

,

Y

и др.

Геномные особенности и регуляторная роль некодирующих РНК среднего размера у арабидопсиса

.

мол. Завод

(

2014

)

7

,

514

527

24.

Кунг

,

JT

,

Colognori

,

D

,

Lee

,

JT

.

Длинные некодирующие РНК: прошлое, настоящее и будущее

.

Генетика

(

2013

)

193

,

651

669

3583990 25.

Халил

,

2

Многие большие межгенные некодирующие РНК человека связываются с комплексами, модифицирующими хроматин, и влияют на экспрессию генов

.

Проц. Натл акад. науч. США

(

2009

)

106

,

11667

11672

26.

Барду

,

F

и др.

Длинная некодирующая РНК модулирует регуляторы альтернативного сплайсинга у арабидопсиса

.

Дев. Сотовый

(

2014

)

30

,

166

176

27. Borsani

,

O

,

Чжу

,

J

,

Verslues

,

РЕ

,

Сункар

,

Р

,

Чжу

,

ДЖК

.

Эндогенные миРНК, полученные из пары природных цис-антисмысловых транскриптов, регулируют солеустойчивость у Arabidopsis

.

Сотовый

(

2005

)

123

,

1279

1291

3137516 28.

Ким

,

ДХ

,

Сун

,

С

.

Запускаемое яровизацией образование петель внутригенного хроматина с помощью длинных некодирующих РНК

.

Дев. Сотовый

(

2017

)

40

,

302

312

5303624 29.

Ван

,

Y

и т. д.

Некодирующая РНК Arabidopsis опосредует контроль фотоморфогенеза с помощью красного света

.

Проц. Натл акад. науч. США

(

2014

)

111

,

10364

.30.

CUI

,

J

,

Luan

,

Y

,

Jiang

,

N

,

BAO

,

H

,

Meng

,

J

.

Сравнительный транскриптомный анализ устойчивых и чувствительных томатов позволяет идентифицировать lncRNA16397, придающую устойчивость к Phytophthora infestans за счет коэкспрессии глутаредоксина

.

Завод J.

(

2017

)

89

,

577

589

31.

Qin

,

T

,

Zhao

,

H

,

CUI

,

P

,

Albesher

,

N

,

Xiong

,

L

.

Локализованная в ядре длинная некодирующая РНК повышает устойчивость к засухе и солевому стрессу

.

Физиол растений.

(

2017

)

175

,

1321

1336

5664461 32.

Дин

,

J

Длинная некодирующая РНК регулирует чувствительную к фотопериоду мужскую стерильность, важный компонент гибридного риса

.

Проц. Натл акад. науч. США

(

2012

)

109

,

2654

2659

33.

Hackl

,

T

,

Hedrich

,

R

,

Schultz

,

J

,

,

,

J

,

För. Ф

.

проверка: крупномасштабная высокоточная коррекция PacBio посредством итеративного консенсуса по краткому чтению

.

Биоинформатика

(

2014

)

30

,

3004

3011

4609002 34.

Хайме

,

H

и др.

eggNOG 4.5: структура иерархической ортологии с улучшенными функциональными аннотациями для эукариотических, прокариотических и вирусных последовательностей

.

Рез. нуклеиновых кислот.

(

2016

)

44

,

286

293

35.

Jia

,

Y

и др.

WEGO 2.0: веб-инструмент для анализа и построения аннотаций GO, обновление 2018 г.

.

Рез. нуклеиновых кислот.

(

2018

)

46

,

71

75

36.

Ван

,

М

и др.

Глобальное исследование альтернативного сплайсинга аллополиплоидного хлопка: ландшафт, сложность и регулирование

.

Новый Фитол.

(

2 018)

217

,

163

178

37. Роджерс

,

М. Ф.

,

Томас

,

J

,

Редди

,

А.С.

,

Бен-Гур

,

А

.

SpliceGrapher: обнаружение паттернов альтернативного сплайсинга по данным RNA-Seq в контексте моделей генов и данных EST

.

Геном Биол.

(

2012

)

13

3334585 38.

Ван

,

L

и др.

CPAT: инструмент оценки потенциала кодирования с использованием модели логистической регрессии без выравнивания

.

Рез. нуклеиновых кислот.

(

2013

)

41

3616698 39.

Чжао

,

X

и др.

Общая идентификация днРНК Arabidopsis выявила регуляцию MAF4 природной антисмысловой РНК

.

Нац.коммун.

(

2018

)

9

6265284 40.

Даккорд

,

N

и др.

Высококачественная de novo сборка генома яблони и динамика метилома раннего развития плодов

.

Нац. Жене.

(

2017

)

49

,

1099

1106

41.

Ван

,

H

и др.

Альтернативный сплайсинг во время развития цветка арабидопсиса приводит к образованию конститутивных и регулируемых по стадиям изоформ

.

Фронт. Жене.

(

2014

)

5

,

25

3

842.

Тэтчер

,

SR

и др.

Полногеномный анализ альтернативного сплайсинга во время развития и стресса от засухи у кукурузы

.

Физиол растений.

(

2016

)

170

,

586

599

43.

Mangano

,

S

,

Juárez

,

SPD

,

Estevez

,

JM

.

АФК регуляция полярного роста в растительных клетках

.

Физиол растений.

(

2016

)

171

,

1593

1605

4936551 44.

Оксеноид

,

К 9000 и др.

Архитектура митохондриального унипортера кальция

.

Природа

(

2016

)

533

,

269

273

4874835 45.

Fu

,

Y

Цитоскелет пыльцевой трубки

.

Курс. мнение биол. растений

(

2015

)

28

,

111

119

46.

Лин

,

Y

и др.

Сравнительный анализ профиля транскриптома клубники с красной и белой мякотью ( Fragaria × ananassa ) дает новое представление о регуляции пути антоцианов

.

Физиология клеток растений.

(

2018

)

59

,

1844

1859

.47.

Lv

,

Y

и др.

Полногеномная идентификация и функциональное прогнозирование чувствительных к азоту межгенных и интронных длинных некодирующих РНК кукурузы ( Zea mays L .)

.

Bmc Genomics

(

2016

)

17

4865003 48.

Wang

,

J

et al.

Полногеномная идентификация и функциональное прогнозирование новых чувствительных к засухе днРНК у Pyrus betulifolia

.

Гены

(

2018

)

9

,

311

6027255 49.

Чеканова

,

ЯА

.

Длинные некодирующие РНК и их функции в растениях

.

Курс. мнение биол. растений

(

2015

)

27

,

207

216

50.

Лагард

,

J

и др.

Высокопроизводительное аннотирование полноразмерных длинных некодирующих РНК с захватом секвенирования с длительным считыванием

.

Нац. Жене.

(

2017

)

49

,

1731

1740

5709232 51.

González-Buendía

,

E

,

Saldaña-Meyer

,

R

,

Meier

,

K

и

Recillas-Targa

,

F

.

Идентификация в масштабе транскриптома взаимодействий in vivo между РНК и РНК-связывающими белками с помощью анализов RIP и PAR-CLIP

.

1288

,

413

428

(

2015

).52.

Wu

,

T

и др.

GMAP: программа геномного картирования и выравнивания последовательностей мРНК и EST

.

Биоинформатика

(

2005

)

21

,

1859

1875

15728110 53.

Ларкин 3 0

М

,

Clustal W и Clustal X версии 2.0

.

Биоинформатика

(

2007

)

23

,

2947

2948

54.

Джин

,

W 9000 и др.

Фактор транскрипции R2R3 M.Y.B. PavMYB10.1 участвует в биосинтезе антоцианов и определяет цвет кожуры плодов черешни (Prunus aviumL.)

.

Завод Биотехнолог. J.

(

2016

)

14

,

2120

2133

5095807 55.

Стивен

,

F 90al.03

Базовый инструмент локального поиска центровки

.

Дж. Мол. биол.

(

1990

)

215

,

403

410

56.

Altschul

,

S

и др.

Проблемы с поиском в базах данных молекулярных последовательностей

.

Нац. Жене.

(

1994

)

6

,

119

129

57.

Олсон

,

S

.

Тиснение открывает анализ последовательности

.

Кратко. Биоинформа.

(

2002

)

3

,

87

91

58.

Li

,

W

и др.

S-РНКаза Apple вызывает ингибирование аминоацилирования тРНК путем взаимодействия с растворимой неорганической пирофосфатазой в растущих трубках с собственной пыльцой in vitro

.

Н. Фитол.

(

2018

)

218

,

579

593

© Автор(ы), 2019

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), что разрешает некоммерческое повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Для коммерческого повторного использования, пожалуйста, свяжитесь с [email protected]

Pucker Powder 12-дюймовые тубы | Nassau Candy

Pucker Powder 12-дюймовые тубы | Нассау Кэнди

Магазин не будет работать корректно в случае, если куки отключены.

Возможно, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшего взаимодействия с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

  • Дом
  • ПОРОШОК ДЛЯ СМАЧИВАНИЯ ТРУБЫ 12 ДЮЙМОВ

PUCKER POWDER ТРУБЫ 12 ДЮЙМОВ

  • 12-дюймовые тюбики для порошка Pucker
  • Для использования с дозатором Pucker Powder
  • Содержит 0.6 унций карамельного порошка

ПРИМЕЧАНИЕ производителя: этот товар недоступен до дальнейшего уведомления.

Creative Concepts Inc. предлагает уникальную систему упаковки своих пикантных, кисло-сладких конфет Pucker Powder®. Используя дозатор самообслуживания, также доступный через Nassau Candy, клиенты могут наполнить многоразовые тюбики Pucker Powder Fun своими любимыми вкусами Pucker Powder. Эти трубки имеют длину 12 дюймов и вмещают до 0,6 унции конфет.

В связи с постоянными проблемами с цепочками поставок по всему миру, мы ценим ваше терпение, поскольку мы прилагаем все усилия, чтобы ориентироваться в наличии продуктов и выполнять ваши заказы.

Дополнительная информация
Кошерный
Марка ПОРОШОК ДЛЯ СБОРКИ
Ящиков на поддоне 9
УПК 831955009127
GTIN (футляр) 10831955009124

Эти заявления не были оценены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов.Эти продукты не предназначены для диагностики, лечения, излечения или предотвращения каких-либо заболеваний.

Контент на этом сайте предназначен только для справочных целей. Нассау Кэнди не заявляют или гарантируют, что питание, ингредиент, аллерген и другие информация о продукте на наших веб-сайтах или мобильных сайтах является точной или полной, поскольку эта информация исходит от производителей продукции. По случаю, производители могут улучшать или изменять формулы своих продуктов и обновлять свои этикетки.Мы рекомендуем вам не полагаться исключительно на представленную информацию на наших веб-сайтах или сайтах для мобильных устройств, а также ознакомиться с этикеткой продукта или контактной информацией. напрямую производителю, если у вас есть вопросы или проблемы с конкретным продуктом. Если у вас есть конкретные проблемы со здоровьем или вопросы о продуктах отображается, обратитесь к лицензированному медицинскому работнику за консультацией или ответы.

камер: все размеры/типы — Магазин велосипедов Sweet Pete’s, Торонто

5 долларов.99–9,99 долл. США

Промышленный стандарт доступен во всех размерах Бутилкаучуковые трубки премиум-качества Bontrager Standard имеют толщину стенки 0,9 мм для идеального баланса экономии веса и долговечности. — толщина стенки 0,9 мм — Оснащен съемными сердечниками клапанов — 100% проверено на гарантированное качество — Лучшее соотношение Эквиваленты 27-дюймовых шин — 700c x 28 – 32 также подходит для 27 x 1-1/8 – 1-1/4 — 700c x 35 – 44 также подходит для 27 x 1-3/8 – 1-3/4

$9,99

Внутренние камеры Giant изготовлены из высококачественной резины стандартного веса, поэтому вы можете продолжать кататься.

$15,99

Название Airstop говорит само за себя. В камерах Michelin Airstop используется запатентованный бутилкаучук, поэтому ваши шины дольше сохраняют давление. Кроме того, усиленный шов штока клапана очень прочный. — 98г — длина клапана 52 мм

$22,99

Защитите себя от проколов с помощью трубок Bontrager с защитой от шипов. В асимметричной конструкции используется более толстая резина на стороне протектора и более тонкая резина в других местах, что снижает вес и обеспечивает максимальную защиту от проколов.Информация о продукте — Толщина 4,1 мм (сторона протектора) — Асимметричная экструзия наносит дополнительную резину вдоль боковины шины и зоны протектора. — 100% проверено на гарантированное качество Эквиваленты 27-дюймовых шин — 700c x 28 – 32 также подходит для 27 x 1-1/8 – 1-1/4 — 700c x 35 – 44 также подходит для 27 x 1-3/8 – 1-3/4

$22,99

Самоуплотняющийся, чтобы вы могли двигаться дальше Защитите себя от проколов с помощью этих специально разработанных самоуплотняющихся трубок, которые мгновенно запечатывают небольшие проколы. Трубки из бутилкаучука высшего качества имеют индекс 0.Толщина стенки 9 мм для идеального баланса экономии веса и долговечности. Информация о продукте — толщина стенки 0,9 мм — Специально разработанная формула мгновенно запечатывает небольшие отверстия от проколов. — 100% проверено на гарантированное качество Эквиваленты 27-дюймовых шин — 700c x 23 – 25 также подходит для 27 x 7/8 – 1 — 700c x 28 – 32 также подходит для 27 x 1-1/8 – 1-1/4 — 700c x 35 – 44 также подходит для 27 x 1-3/8 – 1-3/4

$22,99

Самоуплотняющийся, чтобы вы могли двигаться дальше Защитите себя от проколов с помощью этих специально разработанных самоуплотняющихся трубок, которые мгновенно запечатывают небольшие проколы.Трубки из бутилкаучука высшего качества имеют толщину стенки 0,9 мм для идеального баланса снижения веса и долговечности. Информация о продукте — толщина стенки 0,9 мм — длина клапана 48 мм — Специально разработанная формула мгновенно запечатывает небольшие отверстия от проколов. — 100% проверено на гарантированное качество Эквиваленты 27-дюймовых шин — 700c x 23 – 25 также подходит для 27 x 7/8 – 1 — 700c x 28 – 32 также подходит для 27 x 1-1/8 – 1-1/4 — 700c x 35 – 44 также подходит для 27 x 1-3/8 – 1-3/4

$9,99

Внутренние камеры Giant изготовлены из высококачественной резины стандартного веса, поэтому вы можете продолжать кататься.

$9,99

Внутренние камеры Giant изготовлены из высококачественной резины стандартного веса, поэтому вы можете продолжать кататься.

49,99 – 54,99 доллара США

— Высококачественная сверхлегкая трубка, которая удерживает воздух так же хорошо, как и обычные бутиловые трубки. — Обладает такой же устойчивостью к проколам — длина клапана 40 мм

$14,99

Трубки Continental изготовлены из бесшовного бутилкаучука и проходят индивидуальные испытания на предмет высочайшего качества.

14,99 – 24,99 доллара США

Легкие камеры для более быстрых колес Улучшите характеристики своего велосипеда, уменьшив вращательный вес с помощью легких камер Bontrager. Они имеют более тонкую бутиловую стенку для улучшения ощущения от езды и снижения веса. — Информация о продукте — толщина стенки 0,6 мм — Оснащен съемными сердечниками клапанов — 100% проверено на гарантированное качество

$9,99

Ваши камеры являются одним из самых важных компонентов вашего велосипеда. Bontrager — это камеры премиум-класса со стандартным весом, которые заставят вас кататься.Получите на один больше, чем, по вашему мнению, вам понадобится — вы всегда можете использовать запасной.

$9,99

Ваши камеры являются одним из самых важных компонентов вашего велосипеда. Bontrager — это камеры премиум-класса со стандартным весом, которые заставят вас кататься. Получите на один больше, чем, по вашему мнению, вам понадобится — вы всегда можете использовать запасной.

$14,99

Стандартная толщина стенок наших бутиловых труб Enduro увеличена до 1,2 мм (+33%) для повышения прочности и устойчивости к проколам защемления, особенно проколам защемления.- Подходит для вашего горного велосипеда или шоссейного/пригородного велосипеда и обеспечивает мгновенную дополнительную защиту от проколов без значительного увеличения веса. Клапан P/V Presta (французский клапан) длиной 48 мм для превосходной совместимости с ободом с двойными стенками — Легко узнать по ЧЕРНОЙ цветовой маркировке коробки — Автоматизированная экструзия с горячей подачей и вулканизация с гидравлическим прессованием для стабильной, высококачественной и надежной конструкции — Все трубки накачаны и хранятся в течение 24 часов для проверки на наличие утечек/дефектов перед упаковкой. — Клапан с низким содержанием свинца, никелированный, с резьбовым клапаном и съемным сердечником — Индивидуальная упаковка (коробка/черная коробка)

11 долларов.99

Трубки

Schwalbe удерживают давление воздуха значительно дольше, чем стандартные трубки. Качество и чистота резиновой смеси напрямую влияет на качество трубки. — длина клапана 40 мм

19,99 долларов США

Трубки

Schwalbe удерживают давление воздуха значительно дольше, чем стандартные трубки. Качество и чистота резиновой смеси напрямую влияет на качество трубки.

6,49–8,99 долларов США

Наша стандартная бутиловая камера с диаметром 0.Толщина стенки 9 мм представляет собой отличное соотношение цены и качества и обеспечивает хороший баланс между весом и долговечностью. — Клапан S/V Schrader (американский клапан) с длиной клапана 40 мм для безотказной совместимости с ободом с двойными стенками — В трубках 12 и 14 используются угловые/укороченные клапаны для улучшения зазора/доступности головки насоса. — Легко идентифицируется по ЗЕЛЕНОЙ цветовой маркировке. — Автоматизированная экструзия с горячей подачей и вулканизация с гидравлическим прессованием для стабильной, высококачественной и надежной конструкции — Все трубки накачаны и хранятся в течение 24 часов для проверки на наличие утечек/дефектов перед упаковкой. — Никелированный клапан с низким содержанием свинца со стандартным съемным сердечником клапана Шредера — Индивидуальная упаковка (картон/коробка)

13 долларов.99

Промышленный стандарт поставляется во всех размерах. Бутилкаучуковые трубки премиум-качества Bontrager Standard имеют толщину стенки 0,9 мм для идеального баланса экономии веса и долговечности. Информация о продукте — толщина стенки 0,9 мм — Оснащен съемными сердечниками клапанов — 100% проверено на гарантированное качество — Лучшее значение

19,99 долларов США

Камера для толстых велосипедов — это именно то, что нужно, камера, созданная специально для толстых велосипедов. Индивидуальные размеры идеально подходят для линейки моделей толстых шин Bontrager.Информация о продукте — толщина стенки 0,9 мм — Оснащен съемными сердечниками клапанов — Купите 50 тюбиков, чтобы получить полный кейс — Клапан Шредера 35 мм

$14,99

— Сверхлегкая трубка — Съемный сердечник клапана — толщина стенки 0,65 мм

49,99 долларов США

— Полиуретановая трубка — В два раза прочнее обычной бутиловой трубки — Супер легкий — Очень компактный — Диаметр колеса: 29 » — Ширина трубки: 2,20-2,60 -Длина клапана: 40 мм — Клапан: Преста — Вес тюбика: 100 г — Тип вала: Резьбовой — Устойчивость к шипам: №

49 долларов.99

— Полиуретановая трубка — В два раза прочнее обычной бутиловой трубки — Супер легкий — Очень компактный

49,99 долларов США

— Полиуретановая трубка — В два раза прочнее обычной бутиловой трубки — Супер легкий — Очень компактный

49,99 долларов США

— Полиуретановая трубка — В два раза прочнее обычной бутиловой трубки — Супер легкий — Очень компактный

$12,99

— Стандартная толщина трубы 1 мм — Клапан Шредера

9 долларов.99–14,99 долл. США

— Съемный сердечник клапана — толщина стенки 0,9 мм

$10.00

ВНУТРЕННИЕ ТРУБЫ ОБЫЧНО НЕ ЧТО-ТО, ЧТО ДОЛЖНО БЫТЬ ВОСХИТИТЕЛЬНЫМ. РЕЗИНЫ РЕШИЛИ ЭТО ИЗМЕНИТЬ. Они не претендуют на то, чтобы заново изобрести камеру с помощью технологии, но они привносят новый подход к классически коммерциализированному продукту, который все другие компании рассматривают как запоздалую мысль. В велосипедной индустрии есть много других хорошо спроектированных и эстетически привлекательных продуктов, и они считают, что камеры для разнообразия заслуживают той же участи.Наличие свежей трубки в сумке или кармане джерси спасало наши задницы (и репутацию, давайте будем честными) НАМНОГО чаще, чем чистое нижнее белье.

8,50–13 долларов США

ВНУТРЕННИЕ ТРУБЫ ОБЫЧНО НЕ ЧТО-ТО, ЧТО ДОЛЖНО БЫТЬ ВОСХИТИТЕЛЬНЫМ. РЕЗИНЫ РЕШИЛИ ЭТО ИЗМЕНИТЬ. КАЖДАЯ ЭТИКЕТКА ДЛЯ ВНУТРЕННЕЙ ТРУБЫ MOUNTAIN ТАКЖЕ ПРЕДСТАВЛЯЕТ СОБОЙ САМОКЛЕЯЩУЮСЯ ЗАПЛАТКУ, КОТОРУЮ МОЖЕТ ИСПОЛЬЗОВАТЬ В КАЧЕСТВЕ ЗАЩИТНИКА ШИНЫ ДЛЯ РЕШЕНИЯ РАЗРЫВОВ БОКОВИНЫ. ДА, ОНИ ТОЖЕ ПОЛУЧИЛИ ТЕБЕ СПИНУ, ПАРЕНЬ С БЕСКАМЕРНЫМИ ШИНАМИ! МЕНЬШЕ УПАКОВКИ, ДИЗАЙН С ЦВЕТНОЙ КОДИРОВКОЙ И БОЛЬШОЙ, ЛУЧШИЙ ПАТЧИК С КАЖДОЙ ТРУБКОЙ, РЕЗИНЫ ЗАЩИЩАЮТ ВАШУ СПИНУ БОЛЬШЕ, ЧЕМ КОГДА-ЛИБО.Они не претендуют на то, чтобы заново изобрести камеру с помощью технологии, но они привносят новый подход к классически коммерциализированному продукту, который все другие компании рассматривают как запоздалую мысль. В велосипедной индустрии есть много других хорошо спроектированных и эстетически привлекательных продуктов, и они считают, что камеры для разнообразия заслуживают той же участи. Наличие свежей трубки в сумке или кармане джерси спасало наши задницы (и репутацию, давайте будем честными) НАМНОГО чаще, чем чистое нижнее белье.

6 долларов.99–14,99 долл. США

Наша стандартная бутиловая камера с толщиной стенки 0,9 мм представляет собой отличное соотношение цены и качества и обеспечивает хороший баланс между весом и долговечностью. Клапан P / V Presta (французский клапан) с вариантами длины 48/60/80 мм для широкого диапазона совместимости глубины обода — Легко узнать по КРАСНОМУ цвету коробки — Автоматизированная экструзия с горячей подачей и вулканизация с гидравлическим прессованием для стабильной, высококачественной и надежной конструкции — Все трубки накачаны и хранятся в течение 24 часов для проверки на наличие утечек/дефектов перед упаковкой.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.